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  • Jackson冻干粉抗体溶解(jie)保存方法


    储存:冻干粉原装储存在 2-8℃(不开封原装保存 3-5 年)。

    溶解:加入一定体积 dH2O(参考特定说明书),溶解完全。工作液现用现配。

    保存:

    (短期保存)未稀释的液体,在 2-8℃下稳定约 6 周;

    (长期保存)

    方(fang)法一、水化(hua)后分装,置(zhi)于-70°C 或以下(xia)冷冻(dong)保存(cun),避免重复冻(dong)融。

    方法二、添加等体积的(de)甘油(ACS 级或更(geng)高),终浓度变为原来的(de) 50%,以液(ye)体形式储存于-20℃。


    注意(yi):加入(ru)甘(gan)油后(hou)使蛋白质(zhi)浓度(du)和稀释的范围都减(jian)半(比(bi)如:重溶后(hou)抗体(ti)的浓度(du)是 0.8mg/ml,

    体(ti)积(ji)(ji) 2ml,抗(kang)体(ti)稀(xi)释比例(li) 1:5,000 - 1:100,000 for WB, 加入等(deng)体(ti)积(ji)(ji)(2ml)的甘(gan)油(you)后(hou), 抗(kang)体(ti)浓

    度变成(cheng)(cheng) 0.4mg/ml,体积 4ml,抗体稀释比例变成(cheng)(cheng) 1:2500-1:50000 for WB)。


    水化后保质期:自补水之日起一年。如果测试结果符合预期用途,则可以延长有效期


  • ProSpec 细胞因子和重组蛋白溶解

    我们(men)知道,ProSpec 相当一(yi)部分细(xi)胞因子和蛋白为冻干粉,这使得运输非常便捷,只要常温即可。而(er)且,细(xi)胞因子和蛋白 冻干粉(fen)非常稳(wen)定(ding),在(zai)-20-80条件下可保存数(shu)年。冻干粉在(zai)使(shi)用前需(xu)进行溶(rong)解,然后(hou)以液(ye)体(ti)形式加到(dao)培养(yang)体(ti)系。溶(rong)解步骤非 常(chang)关键,因溶解(jie)不好(hao)会(hui)导致细胞因子或蛋白(bai)的失活,这也是很(hen)多(duo)用户在实际使用中经常(chang)遇到的问题(ti)。

    那么,应该如何进行正确的溶解呢? 

    下面(mian)我们以 Recombinant Human IL-4 (重(zhong)组人(ren) IL-4,产品编号:CYT-211)的(de)说明书为例,对细(xi)胞(bao)因(yin)子或蛋白的(de)溶解方法(fa) 进行(xing)详细的(de)阐述(shu)。 

    拿到重组(zu)人 IL-4 的说明书后,您会发现(xian)有一段(duan)关于 Reconstitution(重悬)的(de)叙述,这段内容含有溶解相关的(de)所有信息。


    1. Centrifuge the vial prior to opening  

    1 步:开盖前离心试(shi)剂管 

    ProSpec 的细胞因(yin)子或蛋白冻干粉装(zhuang)盛在塑(su)料(liao)管中(zhong),为(wei)无菌包装(zhuang)。冻干粉在运输过程中(zhong)可能会因(yin)颠簸而漂散并粘贴于(yu)管壁 或管盖(gai)上,所以在打开(kai)塑(su)料(liao)瓶(ping)盖(gai)前,需将冻干(gan)粉(fen)通过离心收集到管底,以便用很(hen)小体(ti)积的液体(ti)即可将冻干(gan)粉(fen)完(wan)全(quan)溶解(jie)。 

    有很(hen)多(duo)用户会(hui)问一个(ge)问题,即应该(gai)用多(duo)少转速、多(duo)长时间离(li)心试剂管,才能达到(dao)良好的收集效果? 

    答:有些小型(xing)高(gao)速离心机(多为进口(kou)品牌)的面板上有一个 Spin 键,按了此(ci)键后,离心机(ji)会自(zi)动快速上升(sheng)到其最大(da)速度(du) (10000rpm 12000rpm),上升到(dao)最高点后速度即(ji)刻下降,直至停(ting)止旋转,整个过程大约 30s。这(zhei)个 Spin 键足以(yi)很好的将细 胞因子或蛋白(bai)收集到(dao)管(guan)底。但有些(xie)实验室没有这样的高(gao)速离心机,只有最高(gao)转速为 4000-4500rpm 的离心机(ji)。这种(zhong)情况下,需(xu) 3000-3500rpm 离心(xin) 5min,也能达(da)到(dao)类(lei)似的效果。


    2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do notvortex. 

    2 步:用无菌水重悬至 0.1-1.0 mg/ml,不可振荡。 

    这个步(bu)骤即为溶解步(bu)骤,非常重要(yao)。 

    1) 一定要用推荐的溶液重悬(或溶解)冻干(gan)粉(fen) 

    用(yong)于溶(rong)解(jie)细胞因子或(huo)蛋(dan)白的(de)溶(rong)液千(qian)差(cha)万别。此例中(zhong)的(de)重组人 IL-4 需用(yong)水(shui)溶(rong)解(jie),而重组人(ren) IL-2 (产品编号(hao):CYT-209)则(ze)需用(yong) 20mM Acetic Acid (醋(cu)酸)溶解,重组(zu)人 TGF-beta1(产(chan)品编号:CYT-716)需用(yong) 10mMAcetic Acid (醋(cu)酸)溶解(jie) (注:即使同一 重组细胞因子(zi)或蛋白,不(bu)同批次的(de)(de)溶(rong)解方法也可能(neng)有所不(bu)同,因此上面的(de)(de)叙述仅供参考。具体应(ying)该如何溶(rong)解应(ying)以相应(ying)批次的(de)(de)官方 说明书为准)。后续的(de)(de)文章(zhang)中将对各种溶解液的(de)(de)配制方法进行详细的(de)(de)阐述(shu),望继续关注。 

    经常有用(yong)户(hu)会(hui)问,为什么会(hui)有这么多种溶(rong)解方法(fa)? 

    答:我们知道,蛋白的溶解(jie)性(xing)与很多因素(su)有关,其中比较重要的是 pH 值和离子强度。ProSpec 的(de)细(xi)胞因子或重组蛋(dan)白(bai)在 出厂前均(jun)经(jing)严(yan)格测试,说明上所(suo)(suo)标明的(de)(de)溶解液(ye)是(shi)能够将该细(xi)胞因子或重(zhong)组蛋(dan)白完全溶解的(de)(de)液(ye)体。如果您(nin)所(suo)(suo)用(yong)的(de)(de)溶解液(ye)的(de)(de) pH 值(zhi)和 离(li)子(zi)强(qiang)度与说明书中(zhong)所标明的(de)不(bu)符,很多时候(hou)会造成细(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)或(huo)重组蛋白不(bu)能(neng)完全溶解或(huo)者(zhe)根本无(wu)法溶解,这样所配得的(de)细(xi)胞(bao)因(yin) 子或重组蛋白必然活性不(bu)够或丧失(shi)。 

    有不(bu)少用户没注意说明书(shu)上的描述,而是根据(ju)习惯(guan),直接用 PBS 或培养液(1640 或 DMEM 等)等溶解细胞因子(zi)或蛋(dan)白的 冻干粉。这(zhei)样做可以(yi)吗?

    答:有时可以,要看(kan)具体情(qing)况(kuang)。ProSpec 的大多数(shu)细胞因(yin)子或蛋白冻干粉的溶解液不是 PBS,此时千万不能用(yong) PBS 或培 养液(ye)直接(jie)来(lai)溶解(jie),具体原(yuan)因(yin)在上面(mian)已经叙述过。而有部分细胞因(yin)子(zi),如重组人 KGF 和重(zhong)组人 FGF-23 等,说明书(shu)上的溶解液即为 1x PBS,此(ci)时用(yong) PBS 溶解完全没问(wen)题,那么用(yong)培养(yang)液溶解也是(shi)可以的(de),不过(guo)最好还(hai)是(shi)用(yong)先用(yong) PBS 溶解,然后再用培养液稀释。 

    2) 一定要溶解到指定的浓度。 蛋白在一定的浓度(du)(du)范(fan)围(wei)内(nei)可(ke)以保(bao)持良好(hao)的稳定性,这个范(fan)围(wei)就是说明书(shu)上所标(biao)明的浓度(du)(du)范(fan)围(wei),该例为 0.1-1.0mg/ml这个浓度范围对于不同(tong)的细胞因子或重(zhong)组蛋(dan)白是不同(tong)的。 

    高于(yu)或低于(yu)该浓度范围会有什么问题呢? 

    答:首(shou)先(xian),细胞(bao)因子或蛋白会不稳(wen)定,即(ji)很容易出现活(huo)性(xing)下降的现象(xiang)。其(qi)次,高(gao)于这(zhei)个浓度范围,可能会超过该蛋白的 最大溶解浓度,即蛋(dan)白无法完全溶解。再者,高于或低于该浓度范围,蛋(dan)白可能会出现聚集(aggregation),最终(zhong)结果还是(shi)部分 蛋白(bai)未溶解,导致蛋白(bai)活性(xing)的减弱(ruo)。 

    3) 一(yi)定不能振荡(vortex)。 

    这里(li)所说的振(zhen)荡(dang)是指用涡旋(xuan)仪进(jin)行快速振(zhen)荡(dang)。 

    有(you)用户(hu)会问,若想(xiang)保证溶(rong)解液与冻干(gan)粉充分混匀,以实现细胞(bao)因子或(huo)重组蛋白的完全溶(rong)解,该怎么(me)办呢?

    答:多数细(xi)(xi)胞因子或重组蛋(dan)白(bai)的(de)(de)冻(dong)干粉是(shi)非常(chang)容易溶解的(de)(de),一般我们用移液(ye)枪(qiang)的(de)(de)枪(qiang)头轻吹几下,即可使细(xi)(xi)胞因子或重组 蛋白完(wan)全溶解。 

    对于不易溶解的细胞因子或蛋白,ProSpec 会在说明书中进行备注(zhu)。这种(zhong)情况下(xia),您最(zui)好能将要(yao)溶解的细胞因子或(huo)重组 蛋白放在水(shui)平(ping)摇床(shaker)上(shang)低速(su)摇(yao)一(yi)段时间,促(cu)使细胞因子或重组(zu)蛋白完全溶解。 


    3. This solution can be stored at 2-8for up to 1week. 

    第(di) 3 步(bu):该重(zhong)悬液在 2-8最长可保存 1 周。 

    用说明书上推荐的溶液将(jiang)细胞因子或(huo)重组蛋白(bai)(bai)重悬到推荐的浓度后(hou),细胞因子或(huo)重组蛋白(bai)(bai)可放(fang)置在 2-8,即冰(bing)箱的冷藏(zang)室(shi)。 在这(zhei)种条件(jian)下,细胞因子或重组蛋白的活(huo)性(xing)最长可保持 1 周。这对一个(ge)周期(qi)为 5-7 天(tian)的实验(yan),如 DC(树突状细胞(bao))的诱(you)导成(cheng)熟是 足够的(de)。在此期间,只(zhi)要(yao)每次从冰(bing)箱里吸取一定(ding)量的(de)细胞因(yin)子或重组蛋白溶液加入到培(pei)养(yang)体(ti)系内即(ji)可(ke)。 

    其(qi)实(shi),说明书(shu)上推荐的浓度对于一(yi)般(ban)的实(shi)验来讲是比(bi)较(jiao)高的。所以用户通常(chang)会将(jiang)该溶液进一(yi)步稀(xi)释后(hou)再(zai)放(fang)在 4保(bao)存,待 1 周内(nei)用完(wan)。如进行稀释(shi),必(bi)须遵照下面第 4 步的(de)方(fang)法,即需用含载体蛋白(bai)的(de)溶液(ye)进行(xing)稀释,否则(ze)稀释后的(de)细胞因子或重(zhong)组蛋白(bai)很 容易(yi)会粘附在管壁(bi)(bi)或瓶壁(bi)(bi)上,使(shi)得(de)溶液中(zhong)的细胞因(yin)子(zi)或重组(zu)蛋白的浓度下(xia)降,细胞因(yin)子(zi)或重组(zu)蛋白的总活(huo)性则(ze)大为减弱。


    4. For extended storage, it is recommended to further dilute in abuffer containing a carrier protein (example 0.1%  BSA) and store in workingaliquots at -20to -80

    第(di) 4 步:如要长期保存(cun),则需用含载体蛋(dan)白(0.1% BSA,或 10% FBS,或 5% HSA)的(de)溶液(ye)进一步稀释(shi),然(ran)后(hou)分(fen)装冻存(cun)于-20-80。 

    如果一个(ge)实(shi)验周(zhou)期长于一周(zhou),或配制(zhi)的细(xi)胞(bao)因子或重组蛋白一次用不完,我们就需对细(xi)胞(bao)因子或重组蛋白进行长期保存(cun)。 方法是:将已重(zhong)悬(xuan)的(de)细胞因子或蛋白用(yong)含载体蛋白,如 0.1%BSA(牛血清白蛋白)10% FBS(胎牛血清)5% HSA(人血(xue)清白蛋白) 的(de)溶(rong)液将重(zhong)悬液进一步稀(xi)释,然后分(fen)装冻存于-20-80,即常(chang)规冰(bing)箱的冷冻室或超低温冰(bing)箱中。 

    经常有(you)人会在细胞因子或重组(zu)蛋白冻干粉用推荐的(de)溶液重悬后直(zhi)接分装冻存于-20至-80,这(zhei)样可以吗(ma)? 

    答(da):不(bu)行。我们(men)知道,塑(su)料管壁(bi)(bi)对多数(shu)蛋白均有很好的吸附(fu)作用,也就是说溶液中的蛋白很容易粘(zhan)附(fu)在(zai)管壁(bi)(bi)。粘(zhan)附(fu)后, 蛋白是(shi)很难与管壁分离的。做(zuo)过 ELISA 实验的人都(dou)知道,ELISA 的包被抗体(Capture antibody)就是通过这(zhei)种粘附作用包(bao)被到酶 标板上的。 

    载体蛋白(bai),如 1% BSA10% FBS(胎牛血清)5% HSA 等的主要作用是(shi)预先封闭塑(su)料管壁(bi)上的蛋白(bai)结合位点,使(shi)细胞因子 或(huo)重组(zu)蛋(dan)白(bai)不会粘附于管壁。如(ru)果在(zai)细胞因子或(huo)重组(zu)蛋(dan)白(bai)冻干粉(fen)用推(tui)荐的(de)(de)溶液重悬后不用含载(zai)体(ti)蛋(dan)白(bai)的(de)(de)溶液进一步稀释,而直接 分(fen)装(zhuang)冻存,则(ze)溶(rong)液中(zhong)的大部(bu)分(fen)细胞因子或(huo)重组(zu)蛋白均(jun)会粘附(fu)到管壁上,导致溶(rong)液中(zhong)实际(ji)溶(rong)解的细胞因子或(huo)重组(zu)蛋白的浓(nong)度大为降(jiang) 低(di),最终表现为细(xi)胞因(yin)子(zi)或(huo)重组蛋白(bai)活性的下(xia)降。 

    因此,在分装冻存前,一定要用含载体(ti)蛋(dan)白的(de)溶(rong)液将重悬液进一步稀释。稀释后(hou)的(de)细胞因子或重组蛋白(bai)可为任意(yi)浓度,因大 量的(de)载体蛋白可以保(bao)证低浓度(du)细胞因子或重组蛋白仍(reng)然维持较高的(de)稳定性。 

    那么(me),含载体蛋白(bai)的溶(rong)液指的是什么(me)溶(rong)液呢?水(shui)可以(yi)吗(ma)? 

    答(da):水不可。该(gai)溶液通常(chang)是指 pH 近(jin)中性,有一定缓冲能(neng)力的(de)缓冲液,如 PBS,培养(yang)液(RPMI1640, DMEM 等(deng))等。 

    还有一个(ge)经(jing)常被问及的(de)(de)问题,即在做无血清培(pei)养(yang)或(huo)动(dong)物的(de)(de)体(ti)内实(shi)验时,细胞因子中不(bu)能含有 BSA,FBS 或(huo) HSA 等动(dong)物或(huo) 人的蛋白(bai),要想(xiang)长期保(bao)存细胞(bao)因子或重(zhong)组蛋白(bai)该怎么办呢? 

    答:一(yi)种(zhong)方法是订购 ProSpec 的(de)小(xiao)包(bao)装细胞因(yin)子或重(zhong)组(zu)蛋(dan)白,每次(ci)使用一只,用后即废弃。


    5. 后续稀释(shi)液的(de)配(pei)方:即原产品的(de)溶液的(de)配(pei)方。 

    总之,为保(bao)(bao)证细胞因子或重(zhong)组蛋白冻干份(fen)在重(zhong)悬(xuan)后仍能保(bao)(bao)持良好(hao)的生物活性,必须按照说明书中 Reconstitution 的方法(fa) 严格操作。 

    蛋(dan)白有价,实验无价,愿大家珍惜(xi)每次实验机会,严谨认真,每次均能(neng)得到预期的(de)实验结果!


  • 如(ru)何确定细胞因子(zi)的种属交叉(cha)活(huo)性?

    1) 除少数例(li)外,大多数人类(lei)细胞(bao)因子对小(xiao)鼠细胞(bao)均有活性。

    2) 许多小鼠细胞因(yin)子也可(ke)作用于人(ren)类细胞,但比活(huo)性(xing)可(ke)能低 于对应的(de)人类细胞因(yin)子(zi)。 

    3) IL-7 等为(wei)数不(bu)多的人类细胞(bao)因子(zi)作用(yong)于小鼠细胞(bao)时比对应的小鼠细胞(bao)因子(zi)活(huo)性更强。

    4) 干扰素, GM-CSF, IL-3 IL-4 等细(xi)胞因(yin)子种属(shu)特异(yi),对非同源细(xi)胞几(ji)乎没有活性(xing)。

    5) 相反,成纤维细胞生长(zhang)因子(FGFs)和神经营养素 (neurotrophins)高度保守,在不同动物(wu)种(zhong)属(shu)细(xi)胞上均具有很好的活性。

  • ED50 和 units/mg 之间有何(he)关联?

    ED50 为半数有效浓(nong)度,其(qi)定义是可诱导(dao) 50%最大反应的细胞因(yin)子浓(nong)度(du),这种活性表示(shi)法仅适用于剂(ji)量反应曲线呈(cheng) S 的细胞因子。其实,可以(yi)将 ED50 的值接理(li)解为 1unit。如某种(zhong)细胞因子或蛋白的 ED50 为(wei) 1ng/ml,那么 1ng/ml 即可看作是 1unit那么我(wo)们(men)也不难理解,1mg(1x106ng) 该细胞因子或蛋白中应含(han) 1x106/1= 106units. ED50(ng/ml)转化为 units/mg 的公式如下(xia):

    image.png

  • 为什么有时在管(guan)中看(kan)不到细胞因子或蛋白的冻干粉?

    与市场上的许多蛋白(bai)产品不同,ProSpec 的产(chan)品中(zhong)均不(bu)含载(zai)体蛋白或其它添加(jia)物(如牛(niu)血(xue)清白蛋(dan)白(BSA),人血清白蛋白 (HSA)和蔗糖等,并且是以最(zui)低含盐量(liang)的溶(rong)液进(jin)行冻干的,因此冻干后常常不能(neng)形成白色网(wang)架(jia)结构(gou),而是微量(liang)的蛋白在冻干过(guo)程 中(zhong)沉(chen)积在管内(nei),形成很薄或肉眼(yan)不可见(jian)的(de)透(tou)明蛋(dan)白层。打(da)开管盖(gai)前,我(wo)们建(jian)议您(nin)在小离心(xin)机中(zhong)快速离心(xin) 20-30 秒,使附(fu)着(zhe)在(zai)管盖 或管(guan)(guan)壁上的(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)聚集于管(guan)(guan)底。我们(men)的(de)质控步(bu)骤保证每管(guan)(guan)中(zhong)所(suo)含(han)的(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)量(liang)准确(que)无(wu)误,虽然有时(shi)您(nin)无(wu)法(fa)看到(dao)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)粉(fen)末,但(dan)管(guan)(guan)中(zhong)的(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai) 含(han)量(liang)仍是非常精确的。

  • ProSpec 细胞(bao)因子和蛋白产(chan)品的稳(wen)定(ding)性如何?

    除非在产品说明(ming)书(shu)中特(te)别注(zhu)明(ming),ProSpec 相当一部分产品为冻干粉,它们在室温(wen)条(tiao)件下非(fei)常稳定(ding)(至少 1 个月)。尽管如 此(ci),我们(men)还是建议您在收到我们(men)的产品后保存于-20℃,以(yi)确保蛋白 100%的活性。对(dui)于大多数蛋白,重悬后(hou)在 4℃仅能短期保存 (1 )。如想长期保存,请先配制成稀释液(ye)(其中(zhong)必须(xu)含有载(zai)体蛋白,如 0.1% BSA5%HSA,或 10% FBS),然后(hou)分装(zhuang)冻(dong)存于 -20℃-80℃。一(yi)定要避免(mian)反复冻融,因(yin)每次冻融均会引起(qi)蛋白(bai)的部(bu)分失活。

  • Abnova抗体应用类(lei)型:

    WB           Western Blot

    WB-Ce   Western Blot (Cell lysate)         细胞裂解液(天然细胞,内源)

    WB-Re   Western Blot (Recombinant protein)   重组蛋白(外源转染质粒到细菌,表达蛋白)

    WB-Ti   Western Blot (Tissue lysate)      组织裂解液(天然组织,内源)

    WB-Tr   Western Blot (Transfected lysate)      转染裂解液(外源转染质粒到细胞,表达蛋白)

    image.png

    实验类型选择优先(涵(han)盖范围):


    WB > WB-Ti > WB-Ce  


    WB-Re 和(he) WB-Tr,不推荐。如果客户(hu)购买,建议跟客户(hu)讲(jiang)一下,非官网承诺应(ying)用类型,厂家(jia)不受理投诉。


  • Abnova抗体可以做多少张玻片(IF/IHC)?

    【以1:500稀释比,30ul的小包装抗体为(wei)例】


    1:500稀(xi)释 = 500ul 抗(kang)体稀(xi)释液(ye)中加入1ul原(yuan)始抗(kang)体 ==》30ul原(yuan)始抗(kang)体可以配置成为30ul * 500 = 15ml的(de)稀(xi)释后的(de)抗(kang)体【工(gong)作液(ye)】,一(yi)张(zhang)(zhang)玻(bo)片一(yi)般(ban)用50ul的(de)抗(kang)体工(gong)作液(ye) = 15 ml / 50ul = 300张(zhang)(zhang)

    如果(guo)是1:200稀释的话,= 120张


    作(zuo)业:WB实验(yan),一(yi)条膜通常(chang)需要1ml的工作(zuo)液(1:1000稀(xi)释的话(hua),需要加入1ul原始抗体(ti)溶液),实验(yan)次数自(zi)算(suan)?


    PS: 1 ml = 1000 ul


  • ICC,IF,IHC区别(bie)

    image.png

    image.pngimage.pngimage.pngimage.png

  • 试剂盒-标准曲线不一(yi)样?

    · ELISA比色法实验(yan)显色,是(shi)一(yi)个酶(mei)催化的(de)实验(yan)。在一(yi)定范(fan)围内(nei)(nei),环(huan)境温(wen)度(du)越(yue)高(gao)(gao)(gao),酶(mei)活(huo)性越(yue)强,相同(tong)孵(fu)(fu)育时间(jian)内(nei)(nei),温(wen)度(du)高(gao)(gao)(gao)的(de),检(jian)测数(shu)据高(gao)(gao)(gao)。相同(tong)温(wen)度(du),孵(fu)(fu)育时间(jian)长的(de),检(jian)测数(shu)据高(gao)(gao)(gao)。

    · 说明(ming)书的标曲(qu)(qu)只是一个参考用(yong)途,展示大概的结(jie)果形式。不能直接使用(yong),否则,试剂盒就没(mei)有必要(yao)(yao)提供标准(zhun)品了,客户直接用(yong)说明(ming)书的曲(qu)(qu)线(xian)来计算(suan)了,对(dui)吧。【每次(ci)实验,当时都(dou)需要(yao)(yao)做(zuo)标准(zhun)曲(qu)(qu)线(xian),才是最准(zhun)确的方法】

    · 标准曲线(xian)是否良好(hao)? 客(ke)户(hu)可以绘制(zhi)相应的拟合曲线(xian)(线(xian)性,或者曲线(xian)形式),R2大于0.9以上是可以接受的,0.99那就(jiu)是非常好(hao),小数点后面9越(yue)(yue)多越(yue)(yue)好(hao)。


  • 试剂(ji)盒做多(duo)少(shao)个样(yang)品? [举例:KET6013]

    * 试剂盒规格的48或者96,通常代表的是反应次数或者孔的数量。而不是样品数量。(标准品,对照都会参与到反应或者加入到孔中,因此样品数量肯定会少)


    试剂盒做(zuo)一(yi)次实验,需(xu)要(yao)(yao)客(ke)户做(zuo):6个(ge)(ge)标(biao)准品(pin)(标(biao)准品(pin)数量,根据(ju)各个(ge)(ge)说(shuo)(shuo)明书里面(mian)说(shuo)(shuo)的来(lai)设置,6个(ge)(ge)浓度点)+ 一(yi)个(ge)(ge)空(kong)白孔(kong)(kong)(标(biao)准含(han)量为0) = 7。通常每(mei)个(ge)(ge)实验都要(yao)(yao)做(zuo)复(fu)孔(kong)(kong)(最(zui)(zui)少2个(ge)(ge)复(fu)孔(kong)(kong),也有(you)做(zuo)3个(ge)(ge)复(fu)孔(kong)(kong)的。2个(ge)(ge)复(fu)孔(kong)(kong)意味着1个(ge)(ge)东西(xi),需(xu)要(yao)(yao)加(jia)到(dao)2个(ge)(ge)孔(kong)(kong),统计学(xue)需(xu)求(qiu),算平均值等),这么一(yi)来(lai)被(bei)占用的孔(kong)(kong)就是(shi)7*2=14个(ge)(ge)孔(kong)(kong)。96-14=82个(ge)(ge)孔(kong)(kong),只(zhi)有(you)这82个(ge)(ge)孔(kong)(kong)可以(yi)给(ji)客(ke)户拿(na)去测试他(ta)的样品(pin)。如果(guo)也算是(shi)复(fu)孔(kong)(kong),那么就是(shi)82/2=41个(ge)(ge)样品(pin)。这是(shi)最(zui)(zui)多可以(yi)测试多少样品(pin)。

    image.png

    总结(jie):

    【2个复(fu)孔(kong)】样品数量= [ 96 - (标准品数量+对(dui)照组数量)*2] / 2

    【3个复孔】样品数(shu)量= [ 96 - (标(biao)准品数(shu)量+对(dui)照(zhao)组(zu)数(shu)量)*3] / 3


    #强调#:标准品的数量(liang),阳性对照(zhao),阴性对照(zhao) 的设置(zhi),根据(ju)说明书来,有些(xie)试(shi)剂盒是(shi)没有阳性对照(zhao)的。


    以(yi)上为一次性将试剂(ji)盒用(yong)完的样品数量。如果客户要(yao)(yao)做2次实验,需要(yao)(yao)绘制(zhi)2次标曲。对应的,继续(xu)相减。



  • 特殊检测(ce)类型:生物发光法,bio-luminescence

    1. 主(zhu)要涉及(ji)ATP类的试剂盒(he),消(xiao)耗能量ATP,发(fa)光(guang)(萤火虫)。

    2. 主(zhu)要的实(shi)(shi)验(yan):荧光素酶分析(xi)实(shi)(shi)验(yan)。

    image.png

    使用仪器:

    1. 化(hua)学发光仪(yi),

    2. 光度计(ji)(Luminometer),

    3. 多功能酶标仪(含化(hua)学发光,生物(wu)发光检测模块)。


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