亚博网投平台

欢迎您访问武汉亚博7797科技有限公司官方网站!
站点地图 服务热线:400-6800-868
  • 产品
  • 文章

TECHNICAL COLUMN

学习资源

当前位置:亚博网投平台 > 学习资源

组蛋白提取

发布者:亚博7797科技    发布时间:2021-06-08     
分享到:

组(zu)蛋(dan)白(bai)有(you)四种类型:H2A、H2B、H3、H4,组(zu)蛋(dan)白(bai)是染色体基(ji)(ji)本结构(gou)蛋(dan)白(bai),因富含碱(jian)性(xing)氨基(ji)(ji)酸(suan) Arg 和 Lys 而呈碱(jian)性(xing),可与酸(suan)性(xing)的(de) DNA 紧密结合。因为组(zu)蛋(dan)白(bai)是偏(pian)碱(jian)性(xing)的(de),因此(ci)我(wo)们(men)可以(yi)使用(yong)酸(suan)法(fa)来提取。


实验操(cao)作步骤:


1、将 3-5×105 个细胞种到 6 孔板中,接着进行自己需要的实验处理,处理结束(shu)后开始收蛋白,先用 1×PBS 将细胞洗两次,每(mei)次吸尽上清。


2、每孔加入 200ul NETN 裂解液(ye),冰上裂解 15min


High salt NETN buffer


母液

配制 100ML


20mM Tris,PH=8.0

1M

2ml


500mM NACL

5M

10ml


0.5% NP-40

20%

2.5ml


1mM EDTA

0.5M

200ul


H2O


85.3ML


临用前加蛋(dan)白(bai)酶(mei)抑制剂





3、用细(xi)(xi)胞刮刮细(xi)(xi)胞,将细(xi)(xi)胞收集于 1.5mlEP 管中(zhong),1500g,4℃,离心 10min


4、离(li)(li)心结(jie)束后可以在管底(di)看到一小团接近透(tou)明(ming)的(de)沉淀,小心吸尽上清,用 1ML NETN buffer 洗沉淀一次(ci)或两次(ci),1500g,4℃,离(li)(li)心 10min


5、吸(xi)(xi)尽上清,小心吸(xi)(xi),沉淀容易被吸(xi)(xi)走(zou),加入 0.2M HCL 100ul (浓盐酸的浓度为 12M)冰水裂解 30min,(30min 后沉淀变(bian)成(cheng)一个白色的小团块)


6、12000RPM,4℃,15min 离心,此(ci)时组蛋白已经溶解(jie)在上清中(zhong)(zhong),将上清转移到(dao)新的(de) EP 管(guan)中(zhong)(zhong),加入(ru) 20ul 的(de) 1M Tris ph=8.0 中(zhong)(zhong)和(he)酸性(5 倍体积的(de) HCL 加 1 倍体积的(de) 1M Tris PH=8.0, 如 100ul 的(de)上清中(zhong)(zhong),可加入(ru) 20ul 的(de) 1M Tris。


若中(zhong)和(he)不充分(fen),则在(zai)下一步加入 SDS 的时候溶液会呈(cheng)现黄色,可适量补加 1M Tris PH=8.0,只到溶液恢复蓝色)。


7、可(ke)用考马斯(si)法测蛋白浓度


8、用 SDS 煮蛋白,100℃,10min.。接下来可进行(xing) Western blot 实验。


9、跑胶时(shi)(shi),上(shang)样量为 5ug 时(shi)(shi)比较适宜。可以(yi)根据自己(ji)的具(ju)体实验进行调整。


技术专栏分类
最近促销 MORE
特色产品 MORE
现货产品 MORE
  • 高品质保障 先进的生产研发技术
  • 高性价比 价宜质优(you),性价比高
  • 100%保证 从购买到使用,放心无忧
  • 安全运输 完善的保护措施安全运(yun)输

微信(xin)扫码在线客服

微信咨询

全(quan)国免费技术支持

400-6800-868

在线客(ke)服
开心棋牌带小视频苹果风云棋牌