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总RNA的提取( Trizol 法提取 )

发布者:亚博7797科技    发布时间:2021-06-08     
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在(zai)收集(ji)到生物(wu)材料之(zhi)后,最好能即(ji)刻进行 RNA 制备(bei)工作。若(ruo)需暂时储存,则(ze)应以液(ye)氮将生物(wu)材料急速冷(leng)冻(dong)后,储存于(yu)-80℃冷(leng)冻(dong)柜(ju)。在(zai)制备(bei) RNA 时,将储存于(yu)冷(leng)冻(dong)柜(ju)的(de)材料取出,立即(ji)以加入(ru)液(ye)氮研磨的(de)方式打破细胞(bao),不可以先行解冻(dong) ,以避(bi)免(mian) RNase 的(de)作用。


1.提取组织 RNA 时(shi),每(mei)50~100mg 组织用 1ml Trizol 试剂(ji)对组织进行裂解;提取细胞 RNA 时(shi),先离心(xin)沉淀(dian)细胞,每(mei) 5-10 ╳106 个细胞加 1ml Trizol 后,反(fan)复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞;


       2.将上述组织或细胞的Trizol 裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置 5 分钟 ;


3. 在上述 EP 管中,按照每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿的量加入氯仿,盖上 EP管盖子,在手中用力震荡 15 秒,在室温下(15℃~30℃)放置 2~3 分钟后,
12000g(2℃~8℃)离心 15 分钟;


4. 取(qu)上层水相置于新 EP管(guan)中,按照每 1ml TRIZOL加 0.5ml 异(yi)丙(bing)醇的(de)量(liang)加入异(yi)丙(bing)醇,在室温下(15℃~30℃)放置 10 分钟,12000g(2℃~8℃)离心 10 分钟 ;


5.弃上清(qing)(qing) ,按照每(mei) 1ml TRIZOL 加(jia) 1ml 75%乙醇进 行洗涤,涡 旋混合,7500g(2℃~8℃)离心 5 分钟,弃上清(qing)(qing);


6. 让(rang)沉淀的 RNA 在室(shi)温下自然(ran)干燥;


7.用(yong) Rnase-free water 溶解 RNA 沉淀(dian)。



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