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BioVendor miRNA定量检测试剂盒(PCR法)

发布者:亚博7797科技    发布时间:2021-07-06     
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miRNA是许多人类病理学中有潜力的诊断和预后生物标志物,如何准确对miRNA进行定量呢?前期我们介绍了免疫法定量miRNA的试剂盒,今天介绍常规基于PCR法的miRNA定量的试剂盒——双尾RT-qPCR。


传统microRNA PCR检测方法的痛点:用传统的PCR法检测microRNA的挑战在于,两个常规PCR引物的总长度几乎是microRNA长度的两倍,因此不适合于做miRNA的引物。以前的技术通过使用发夹引物延伸microRNA,添加poly A尾巴或通过连接添加片段来解决这个问题,但是这会降低检测的灵敏度和特异性。此外,这些方法无法检测在3'末端修饰的microRNA,因为它会干扰延伸过程。

 

市面上常见的miRNA定量检测试剂盒原理

市(shi)面上常(chang)见的miRNA定量检测试剂盒(he)原(yuan)理

 

BioVendor专利产品——双尾RT-qPCR

我们专利的(de)双尾(wei)RT-qPCR技术(shu),具有独(du)特的(de)RT引物机制,与其他方法相比,可提供出色(se)的(de)灵敏度和特异性。双尾(wei)RT-qPCR技术(shu)已被开发用(yong)于(yu)总的(de)miRNA和piRNA的(de)定(ding)量。

 

双(shuang)尾(wei)(wei)RT-qPCR原理(li):与使用单(dan)个(ge)(ge)(ge)结合(he)(he)探(tan)(tan)(tan)针不(bu)同,双(shuang)尾(wei)(wei)PCR使用两(liang)个(ge)(ge)(ge)半探(tan)(tan)(tan)针,它(ta)们分别结合(he)(he)到不(bu)同的(de)microRNA片(pian)段上,这些片(pian)段通过折叠的(de)系链(lian)连接(jie)。虽然每个(ge)(ge)(ge)半探(tan)(tan)(tan)针本身都很(hen)短, 无法结合(he)(he)到microRNA上,但(dan)当两(liang)个(ge)(ge)(ge)半探(tan)(tan)(tan)针互补时,它(ta)们会协同结合(he)(he),这种(zhong)结合(he)(he)的(de)特异性是(shi)非(fei)常(chang)(chang)高的(de),因为(wei)在(zai)短半探(tan)(tan)(tan)针中错配(pei)的(de)影响非(fei)常(chang)(chang)大。然后可以使用两(liang)个(ge)(ge)(ge)特定序列引物对形成(cheng)的(de)cDNA进(jin)行(xing)PCR扩增,用SYBR进(jin)行(xing)检测。

 

双尾RT-qPCR原理

 

双尾RT-qPCR优势:

  • 高灵敏度(最多(duo)少于(yu)10个分子)

  • 高(gao)特异性(xing)

  • 适(shi)合于多种样本(血(xue)(xue)浆/血(xue)(xue)清,血(xue)(xue)液,组织等)中的miRNA检测和(he)定量

  • 通过(guo)折叠(die)的系(xi)链连接的两个半探针(结合不同的microRNA片段(duan))

  • 动(dong)态范围广(高达9 log)

  • 在进(jin)行单重(zhong)qPCR之前,可进(jin)行双管(guan)多重(zhong)RT-PCR

  • 提供定制化(hua)服务

 

1.高灵(ling)敏度(du)及特异(yi)性:

  • 5?互补片段显著提高分析的灵(ling)敏(min)度:


 双尾RT-qPCR优势

  • 5? 互补(bu)片(pian)段显著(zhu)提高检测的特异性:


 双尾RT-qPCR优势


5′-hemiprobe的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)特异(yi)性及(ji)灵(ling)敏度验证:为(wei)了(le)测试5′-hemiprobe对特异(yi)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)贡(gong)献(xian),我(wo)(wo)们比较了(le)两(liang)种双尾(wei)RT引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)区分(fen)Let-7 miRNA家族的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)两(liang)个(ge)成(cheng)员:Let-7a和(he)Let-7f的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)能力(li),它们仅(jin)有(you)位于miRNA序(xu)列(lie)(lie)中心(xin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)单个(ge)核(he)苷(gan)酸(suan)(suan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)差异(yi)。RT 1引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)5'-hemiprobe设(she)计成(cheng)与let-7a的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)5'-末端的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)前十个(ge)核(he)苷(gan)酸(suan)(suan)结合, 而(er)RT 2引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)5'-hemiprobe结合在let-7a的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)8个(ge)核(he)苷(gan)酸(suan)(suan)上,通过这种设(she)计,区分(fen)let-7a和(he)let-7f的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)核(he)苷(gan)酸(suan)(suan)只是(shi)由RT 2引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)5′-hemiprobe检(jian)测的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de),而(er)不(bu)是(shi)由RT 1引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)检(jian)测的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。RT 2引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)5′-hemiprobe也(ye)很短(8个(ge)核(he)苷(gan)酸(suan)(suan)),因为(wei)我(wo)(wo)们认为(wei)探针(zhen)序(xu)列(lie)(lie)较短时(shi)错配(pei)(pei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)影响(xiang)会(hui)更加明(ming)(ming)显(xian)(xian)。其余(yu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)RT 1和(he)RT 2引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)序(xu)列(lie)(lie)以及(ji)所用的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)PCR引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)是(shi)完全(quan)相(xiang)同(tong)(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。使用RT 2引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)时(shi),完全(quan)匹配(pei)(pei)和(he)错配(pei)(pei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)模板之间的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)ΔCq(ΔCq= 11.07)显(xian)(xian)著(zhu)大于使用RT 1引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)(ΔCq = 4.66),不(bu)带有(you)5′-hemiprobe的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)不(bu)同(tong)(tong)碱基重(zhong)叠的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)RT 2引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu),而(er)不(bu)是(shi)不(bu)带有(you)RT 1引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)RT 2引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)。这证明(ming)(ming)了(le)5'-半探针(zhen)对系统特异(yi)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)重(zhong)大贡(gong)献(xian)。值得注意的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi),两(liang)种双尾(wei)RT引(yin)(yin)(yin)(yin)物(wu)(wu)(wu)(wu)完全(quan)互补的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)let-7a microRNA的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)Cq值相(xiang)等,表明(ming)(ming)即使5′-hemiprobe的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)长度有(you)两(liang)个(ge)碱基的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)不(bu)同(tong)(tong),检(jian)测灵(ling)敏度仍然相(xiang)同(tong)(tong)。

 

2.适用样(yang)本类型丰富:

5′-hemiprobe.png

新鲜组织,冷冻/福尔马林固定组织的

血浆/ 血清/ 尿液/ 脑脊液/ 生物液体新鲜组织,冷冻/福尔马林固定组织的

细胞,外泌体

细胞,外泌体

 

3.miRNA定量的试(shi)剂盒检测流程(cheng)简便:

5′-hemiprobe-3.jpg

相关(guan)miRNA定量(liang)的试剂盒产品推荐(jian):

产品货号产品名称品牌
RMR001RmiRNA Isolation Kit Cells-ExosomesBioVendor
RMR002RmiRNA Isolation Kit Plasma-SerumBioVendor
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